Análisis
multifactorial para determinar condiciones predisponentes a pudrición del racimo en uva
cv. Red Globe En la temporada 2004-2005 se llevó a cabo un estudio conducente a analizar un conjunto de variables abiótica y biológicas, que pudieran predisponer a racimos del cv. Red Globe a en la desarrollar pudrición ácida. Se analizó el índice de daño (ID) al momento de cosecha y a los 60 y 120 días de almacenaje refrigerado. La información base se obtuvo de 20 predios, distribuidos entre la IV y VI regiones de Chile, con antecedentes de niveles diferenciados de incidencia de la enfermedad. En cada predio se obtuvo datos tanto de los registros BPA como de mediciones semanales efectuadas en cuarteles previamente seleccionados. Adicionalmente, se realizaron análisis de laboratorio para determinar los contenidos de nutrientes en tejido foliar, fruto y suelo.La información se tabuló y se procesó (programa estadístico MINITAB) con el objeto de asociar y jerarquizar las variables que explican, en niveles significativos, el ID observado en: cosecha, 60 y 120 días de almacenaje refrigerado. El ID observado se determinó como promedio de 8 cajas en cada fecha y se expresó en una escala de 0 a 5.Los resultados indican que los factores que presentan mayor efecto sobre el ID (p < 0,05) son: (1) en cosecha: ‘incidencia de oídio’, ‘contenido de N en el suelo’, ‘número de horas con racimo mojado (> 90% de humedad)’ y ‘número de aplicaciones de insecticida’; (2) 60 días: ‘contenido de N en el suelo’, ‘incidencia de oídio’ y ‘contenido foliar de Cu’; (3) 120 días: ‘incidencia de oídio’, ‘contenido de N en el suelo’, ‘incidencia de Botrytis’ y ‘número de aplicaciones de fungicida contra Botrytis’.
Eficiencia de fungicidas “In
Vitro” en la inhibición del hongo Geotrichum candidum agente causal de la pudrición
ácida en duraznos En la temporada 2004/2005 se observó en duraznos provenientes de huertos ubicados en la VI Región, síntomas de; pudrición ácida causada por el hongo G. candidum. Considerando que no había información suficiente sobre la eficiencia de fungicidas con autorización de uso para el control de la enfermedad, se realizaron; ensayos que incluyeron pruebas " in vitro para establecer su eficiencia en la inhibición del hongo. Los fungicidas se utilizaron en diferentes concentraciones de ingrediente activo, expresadas en ppm. Como parámetros de evaluación se calcularon los porcentajes de inhibición del crecimiento del micelio del hongo para cada fungicida y posteriormente éstos se transformaron en unidades Probit. Los valores EC50 de los fungicidas se determinaron a través de un análisis de regresión entre los % de inhibición del crecimiento del micelio, transformado a unidades Probit y las concentraciones de los fungicidas expresadas en Log base 10. De acuerdo con los resultados, se comprobó que sólo los fungicidas tebuconazol y propiconazol, inhibieron completamente el crecimiento del micelio del hongo.
Fuentes de inoculo de la “Pudrición
Ácida” causada por Geotrichum candidum en duraznos La pudrición ácida fue descrita en Chile en 2004, afectando diferentes variedades de duraznos y nectarinos en postcosecha. Los huertos que presentaban el problema se localizaban principalmente en la VI región y la Región Metropolitana. A pesar que los síntomas de la pudrición aparecen en postcosecha, era necesario conocer el momento de infección de los frutos y especialmente donde se localizaban las fuentes de inóculo en los huertos afectados. Considerando lo anterior, se realizó una prospección en 52 huertos de durazneros de la VI Región, en donde se colectaron muestra de frutos del suelo y del tercio inferior de los árboles. El criterio de muestreo fue completamente al azar. Posteriormente las muestras de frutos fueron sometidas a proceso de cámara húmeda e incubadas por 7 días. De acuerdo con los resultados obtenidos, de todos los frutos provenientes del suelo fue posible aislar e identificar G. candidum. Respecto a los frutos colectados del tercio inferior de los árboles, los resultados variaron según la condición de manejo del huerto.
Caracterización de la respuesta
defensiva en vid (cv. Thompson Seedles y Carménére) frente a la infección por el hongo
biotrófico Uncinula necator Las plantas, responden a los estímulos ambientales y al ataque por patógenos vía inducción de diferentes mecanismos de defensa. Estos incluyen producción de especies reactivas de oxígeno (ROS)Las plantas, responden a los estímulos ambientales y al ataque por patógenos vía inducción de diferentes mecanismos de defensa. Estos incluyen: deposición de barreras mecánicas, síntesis de metabolitos secundarios, producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) necesarias para la activación de la respuesta hipersensitiva (HR) y, síntesis de ácido salicílico (SA) clave para la inducción de la respuesta sistémica adquirida (SAR), entre otros. En la presente propuesta se estudió la respuesta de defensa de Vitis vinifera cv. Thompson seedless y Carménère frente al oídio o peste ceniza, cuyo agente causal es el hongo biotrófico Uncinula necator. Se analizó el avance de la infección, por tinción con azul de lactofenol, en muestras tomadas entre 0 y 15 días post inoculación (p.i.). Posteriormente, se identificaron patrones de expresión de genes involucrados en la HR, como son estilbeno sintetasa (STS) y catalasa (CAT). Finalmente, para investigar la activación de la SAR, se midieron los niveles de SA. La microscopía óptica mostró que la formación del apresorio primario ocurre 12 horas p.i. y la formación de la hifa primaria 1 día p.i., en ambos cultivares. Los análisis de Northern blot mostraron, para el gen STS, un aumento de la expresión de los tratamientos con respecto a los controles en el cultivar Carménère y, la aparición de una segunda isoforma del gen 7 días p.i. en ambos cultivares. El gen CAT no presentó mayores diferencias de expresión entre controles y tratamientos, así como tampoco se observó una acumulación de SA en ambos cultivares. Estos resultados indicarían que no se estaría estableciendo SAR como respuesta defensiva frente a la infección por U. necator en los cultivares estudiados.
La eficacia biocontroladora de cepas nativas de Bacillus spp.
sobre Erwinia carotovora subsp. carotovora fue evaluada en un ensayo de laboratorio con
papas cv. Desiree. Estas fueron puestas en condiciones de alta humedad relativa, para
luego ser inoculadas con una suspensión de la bacteria patógena, en una concentración
de 106 UFC/ml, antes y después de la aplicación de una mezcla de tres cepas nativas de
Bacillus spp. (cepas Vilcún, Antumávida y Maguellines). De esta forma, los tratamientos
fueron: 1) papas sin inoculación; 2) papas inoculadas con el patógeno, sin aplicación
de Bacillus; 3 y 4) papas inoculadas antes y después de la aplicación de la mezcla de
Bacillus, respectivamente. La dosis de aplicación de las cepas biocontroladoras fue de
100 ml por Kg de papas, a una concentración de 107 UFC/ml. Una vez aplicados los
tratamientos, los tubérculos fueron envueltos en una lámina plástica, y puestos en
almacenaje en cajas de cartón por 90 días. Luego de este periodo, se evaluó la
incidencia de pudrición. Sólo los tratamientos con aplicación de la mezcla de Bacillus,
posterior a la inoculación (T4), y el control sin inoculación (T1), presentaron una
incidencia significativamente menor (P<0,05), que la obtenida por el testigo con
inoculación (T2).
Determinación de la importancia de Pepino
mosaic potexvirus-PepMV en áreas productoras de tomate bajo invernadero de la zona
central de Chile Durante la temporada 2004/2005 se efectuó un muestreo dirigido hacia
plantas de tomate y malezas asociadas al cultivo, en invernaderos ubicados en la regiones
V, Metropolitana, VI y VII. Este consideró plantas con síntomas atribuibles a
enfermedades de naturaleza viral e individuos tanto sintomáticos como asintomáticos en
el caso de malezas. El objetivo fue establecer la importancia del Pepino mosaic
potexvirus-PepMV en algunas áreas productoras de la zona central de Chile. Un total de 60
muestras de hojas de tomate y 48 de hojas de malezas fueron recolectadas, siendo detectado
el virus en todas las zonas prospectadas. En el caso de malezas fue posible determinar la
presencia del patógeno en los géneros Taraxacum, Plantago, Chenopodium, Brassica,
Senecio, Convolvulus, Bidens, Urtica, Euphorbia, Silene, y Mentha, además de Amaranthus,
Malva, Nicotiana, Solanum y Sonchus, ya descritas previamente en Europa como hospederos
alternantes del virus. Adicionalmente, a fines de la temporada 2004/2005, y con el fin de
determinar la importancia de restos de cultivo como fuente de inóculo del patógeno,
desde un invernadero de tomate infectado con el virus, se recolectaron muestras de
raíces, tallos y hojas del cultivo, durante los seis meses posteriores al término de
cosecha. Los resultados obtenidos indicaron que el patógeno es capaz de mantenerse a
niveles detectables por DAS-ELISA hasta un mes luego de la incorporación de los rastrojos
al suelo.
Evaluación de cepas nativas de Bacillus
spp. en el biocontrol de Pseudomonas syringae pv. syringae, en cultivos de cerezo en la
zona de Colbún El proyecto de investigación en biocontroladores, se basa en la
búsqueda de microorganismos que presenten la habilidad de competir con agentes causales
de enfermedades en cultivos de importancia agrícola. Por lo tanto, en una primera etapa,
se colectarán cepas nativas de l genero Bacillus desde localidades de la VII Región. Una
vez realizados ensayos de eficacia in vitro se estableció un ensayo de campo, en la
localidad de Colbun, en donde se evaluó el efecto de una mezcla de Bacillus spp. y
Brevibacillus brevis, en el control de Pseudomonas syringae pv. syringae, en un cultivo de
cerezo de 10 años con una alta incidencia de la enfermedad. Los tratamientos consistieron
en el manejo tradicional del predio (Nordox y antibioticos) y, la mezcla de Bacillus y la
combinación de los dos anteriores. Los resultados parciales obtenidos hasta ahora,
indican un claro efecto del tratamiento, con las cepas de Bacillus, superando el nivel de
control del manejo tradicional del predio, disminuyendo la severidad de la enfermedad y la
incidencia de poblaciones epifitas del patógeno en yemas de los árboles.
Evaluación de cepas nativas de Bacillus
spp. en el biocontrol de Pseudomonas syringae pv. tomato en cultivos de tomate bajo
invernadero La evaluación de una mezcla de cepas nativas de Bacillus spp. sobre la
enfermedad peca bacteriana causada por Pseudomonas syringae pv. syringae fue realizada en
ensayos de invernadero en la localidad de Quillota (V Región) y Colín (VII Región). Los
tratamientos consistieron en 1) control tradicional del predio (caldo bordelés,
oxicloruro de cobre y antibioticos); 2) la mezcla de cepas nativas de Bacillus spp.; y 3)
la combinación de los dos tratamientos anteriores. Los resultados obtenidos indican un
claro efecto significativo de los tratamientos, logrando la mezcla de las bacterias
biocontroladoras un efecto similar o superior al control tradicional del invernadero
comercial. Además, fue posible comprobar un efecto curativo de las cepas de Bacillus,
sobre las lesiones producidas por la bacteria fitopatógena.
Evaluación de dos protocolos para
determinar saponinas de extractos de quillay retenidas en el suelo El trigo es afectado por la pudrición radical causado por
Gaeumannomyces graminis var tritici (Ggt), enfermedad de importancia a nivel mundial. La
ausencia de alternativas efectivas de control de la enfermedad, y el hecho que saponinas
triterpenoides determinan la resistencia de avena a las infecciones por el hongo, son una
vía para el desarrollo de nuevas estrategias para su control. El uso de extractos
saponínicos de quillay ha sido utilizado in Vitro en el control de Ggt, y su
comportamiento en el suelo, está siendo evaluado. Esta investigación desarrolló dos
protocolos para la detección de saponinas, por las técnicas de Afrosimetría (altura de
espuma) y Espectrofotometría, para evaluar indirectamente la retención de saponinas
aplicadas a un suelo Serie Vilcún (IX Región). Se evaluó la retención de tres
soluciones de saponinas (100, 300 y 500 ppm) de un extracto de quillay, aplicadas al suelo
en un módulo de experimentación. Un testigo con agua actuó como factor de corrección
para las lecturas de concentración en los lixiviados. Las curvas de lixiviación
mostraron que este proceso se inició entre el tercer y sexto día, alcanzando su máximo
entre los días 8 y 14. Los resultados de retensión de saponinas en el suelo obtenidos
por ambas técnicas alcanzaron entre un 74 y 86,2% del total aplicado, a los 20 días.
Ambos protocolos permitieron detectar la presencia y concentración de saponinas de
quillay en los lixiviados. Simulando un modelo cromatográfico, se evaluó la retensión
de una solución de 50 mg de saponinas aplicados a una columna de suelo sometida a un
flujo constante de agua, que permitió determinar una retención total del 52,96% de
saponinas y descartar la posible descomposición de éstas en el medio.
Nuevo reporte de detección en Chile de
Xanthomonas arboricola pv. corylina en avellano europeo (Corylus avellana) Xanthomonas arborícola pv. corylina fue detectada en plantas de avellano europeo (Corylus avellana) en viveros de la VII y VIII Región. Esta enfermedad fue reportada por primera vez en el país en 1987, por Guerrero y Lobos, no presentando nuevos reportes hasta la fecha. Los primeros análisis se realizaron a partir de ramillas de avellano provenientes de un vivero de la VIII región con síntomas de manchas foliares y tizón de brotes, posteriormente se determinó en viveros de la VII Región tanto en forma sintomática como asintomática. Los aislamientos se realizaron en medio de cultivo selectivo, procediéndose posteriormente a determinar la morfología, hidrólisis del tween, pigmentación, hipersensibilidad en tabaco, Gram y oxidasa, pruebas que caracterizaron los aislados como pertenecientes al género Xanthomonas. En una segunda etapa del diagnóstico se procedió a realizar las siguientes pruebas bioquímicas y fisiológicas: hidrólisis de la esculina, hidrólisis del almidón, crecimiento a 35ºC y utilización de L-arabinosa, D-arabinosa, glucosa, galactosa, manosa, sucrosa, maltosa, trehalosa, celobiosa, glicerol, lactosa, adonitol, manitol, sorbitol, dulcitol y eritritol, correspondiendo sus resultados a la especie Xanthomonas arboricola pv. corylina. A partir de estas determinaciones se está desarrollando en un vivero de la VII Región el estudio de la distribución poblacional anual de la especie y la posible presencia de cepas resistentes al cobre.
Comportamiento de diferentes tratamientos
fungicidas aplicados después de detectar signos de Uncinula necator sobre bayas del cv.
Moscatel de Alejandría Condiciones favorables para el desarrollo del oidio de la vid (Uncinula necator), determinaron que la enfermedad provocara pérdidas de importancia económica en las temporadas 2003 2004. Programas de control tradicionalmente exitosos, no alcanzaron el acostumbrado nivel de eficacia determinando la necesidad de recurrir a diversas estrategias para disminuir el impacto del patógeno. En función de esto, durante dos temporadas se condujo un estudio que tuvo por objetivo, verificar el comportamiento de diferentes tratamientos fungicidas, en una secuencia de tres aplicaciones, en intervalos de 5 días, a partir de la detección de signos de U. necator sobre bayas del cultivar de vid Moscatel de Alejandría. En ambas temporadas los tratamientos fueron establecidos en la localidad de Limarí Bajo Ovalle, bajo un diseño experimental de bloques al azar con cuatro repeticiones. Los tratamientos evaluados en la primera temporada correspondieron a; Prosper 500 EC ( 30, 40, 60 y 67 cc/Hl), trifloxystrobin + tebuconazole ( 13 y 20 cc/Hl), Tiebreak ( 80 cc/Hl) y Bayleton ( 25 cc/Hl). Las evaluaciones se efectuaron 7, 14 y 21 días después de la última aplicación. Los resultados determinaron que 14 días después de la última aplicación, el testigo sin protección fungicida presentó 85.9% de sus racimos enfermos. Tratamientos fungicidas presentaron entre 8.6 y 2.9% de sus racimos enfermos (Bayleton 25 cc/Hl y Prosper 500 EC 67 cc/Hl respectivamente). En la segunda temporada los tratamientos fueron aplicados 7 días después de detectados por primera vez signos de U. necator. Los resultados demostraron que 14 días después de la última aplicación, el testigo sin protección fungicida presentó 97.1% de sus racimos enfermos. Tratamientos fungicidas alcanzaron porcentajes de racimos enfermos que variaron 54.3 y 5.0% (Bayleton 25 cc/Hl y Prosper 300 EC 100 cc/Hl respectivamente).
Detección de PepMV en tomate de
invernadero en la V región de Chile, utilizando técnicas RT-PCR y RFLP, y estudios
de su transmisión por semilla El PepMV (Pepino Mosaic Virus), es un Potexvirus de cadena simple de ARN, que presenta alta variabilidad y que se ha diseminado por diferentes zonas productoras de tomate en el mundo, siendo reportado en Chile el 2002 en invernaderos de la V Región. El virus es altamente infeccioso por ser transmitido mecánicamente y por semillas, en un rango estrecho de hospederos (solanáceas). El presente trabajo tuvo como objetivos comprobar la transmisión por semilla de PepMV en frutos comerciales de tomate mediante DAS-ELISA y evaluar el uso de PCR para su detección y diagnóstico en tomate y RFLP para su tipificación. Se analizaron muestras de plantas con síntomas del virus proveniente de invernaderos de Quillota por medio de DAS-ELISA, PCR y RFLP, y se realizaron prueba de transmisión de PepMV por semilla. Las pruebas de DAS-ELISA confirmaron la presencia del virus en invernaderos de la V Región, mientras que la prueba de RT-PCR con los partidores Pep1 y Pep2 permitió la detección de PepMV de Quillota (banda de 375 pb), lo cual no ocurrió con los partidores diseñados para UK y UK2. El análisis de las muestras de tomate por RFLP permitieron establecer la presencia de los aislados PQ1 y PQ2, diferente a los previamente conocidos P1, P2 o P3. Análisis a semillas con DAS-ELISA, demostraron la presencia de PepMV en altas concentraciones, mayores a las encontradas en hojas y frutos, pero la transmisión del virus desde semilla contaminada a plántulas fue sólo de 0,59%, por lo cual la transmisión por semillas no parece ser una forma eficaz de dispersión para el PepMV.
Se desarrolló un ensayo para medir la eficacia de un producto de origen orgánico a base de aminoácidos derivados de extractos de fermentación de plantas, para el control del nemátodo del nudo de la raíz Meloidogyne spp. en el cultivo del tomate ecotipo Poncho Negro, siendo este último muy susceptible al ataque de nemátodos noduladores. El ensayo fue realizado en la Fac. de Agronomía, U. de Tarapacá Km. 12 Valle de Azapa, Arica, durante los meses de Mayo–Agosto de 2005. Se utilizó un diseño experimental completamente aleatorizado, con cinco repeticiones y cuatro tratamientos: T0: Suelo estéril; T1: Suelo estéril + inóculo (5.000 huevos de Meloidogyne spp.); T2: Suelo estéril + inóculo (5.000 huevos de Meloidogyne spp) + producto aplicado a los 14 y 28 días, y T3: Suelo estéril + inóculo (5.000 huevos de Meloidogyne spp) + producto aplicado a los 28 días, con un total de 20 unidades experimentales (macetas). En el ensayo, los huevos se incorporaron al suelo de la maceta por medio de una pipeta de 10 ml, en una concentración de 5.000 huevos de nemátodos por planta, a una profundidad de 4 a 5 cm. Al cabo de 14 y 28 días se aplicó al suelo de la maceta el producto de origen orgánico por medio de una micropipeta de 5 ml, en una dosis de 0,02 gr/10 ml de agua. Los datos fueron sometidos a ANVA y para las comparaciones múltiples de medias se usó la Prueba de significación de Tukey a = 0,05. El inóculo correspondió a huevos de M. incognita y M. javanica que fueron obtenidos de muestras de raíces infestadas. En este ensayo se empleó la metodología establecida por el Crop Nematode Research and Control Project (CNRCP). Para medir el grado de eficacia del producto se utilizó la fórmula básica de Abbott (1925). Para medir el índice de agallamiento se utilizó la escala de Taylor & Sasser; Para medir el índice de reproducción (IR) se utilizó la fórmula establecida por Oostenbrink (R=Pf / pi) donde pi = inóculo inicial, 5.000 huevos, además se determinó peso de raíz y altura de planta. Los resultados obtenidos demuestran que el tratamiento dos obtuvo un mayor grado de eficacia 40%, un índice de reproducción de huevos bajo con un promedio de 0,276, un índice de agallamiento 2, un mayor peso de raíz y mayor altura de planta en comparación al testigo y a los demás tratamientos.
Cultivares comerciales de papa en Chile y
su resistencia a enfermedades causadas por Fusarium spp, Helminthosporium solani,
Rhizoctonia solani, Streptomyces scabies y Erwinia carotovora Conocer el grado de resistencia o susceptibilidad de un cultivar de papa es una herramienta importante en un programa de manejo integrado de enfermedades, ayudando en la toma de decisiones productivas para disminuir las pérdidas tanto de la calidad como del rendimiento. Desde las temporadas 2001 a 2004 se han realizando evaluaciones de resistencia a Pudrición seca, Sarna plateada, Rizoctoniasis, Sarna común y Pudrición blanda en 18 cultivares comerciales de papa en la zona sur de Chile. Las evaluaciones a Pudrición seca y pudrición blanda se han efectuado mediante inoculaciones de tubérculos con aislamientos locales de Fusarium spp (Ph24-D) y Erwinia catovora atroseptica (EcaT), respectivamente. Los tubérculos son inoculados con una suspensión conocida del agente causal e incubados en cajas plásticas con humedad cerradas a 20ºC, durante 7 días. Se evalúa el área de pudrición. Las evaluaciones de resistencia a Rizoctoniasis y sarna común se han realizado en parcelas de campo infestadas con aislamientos locales de R. solani AG3 (R12) y S. scabies (S44). Durante el cultivo se evalúa la incidencia de cancros en brotes, tallos y estolones. A la cosecha se determina la presencia de costra negra y sarna común en los tubérculos. La Sarna plateada se ha determinado realizando pruebas en almacenamiento prolongado bajo condiciones que favorecen el desarrollo de H. solani. Se observó que los cultivares evaluados presentan una resistencia relativa variable a las enfermedades en estudio, presentando muchos de ellos una alta susceptibles a más de una enfermedad. De modo que en el manejo del cultivo, de acuerdo al objetivo de producción, se debe enfatizar el uso de un control integrado.
Interacción calidad de semilla,
tratamiento de semilla y cultivar en el control integrado de Rizoctoniasis en un cultivo
de papa con y sin riego La Rizoctoniasis es producida por el hongo Rhizoctonia solani y afecta al cultivo de papa causando cancros y estrangulamiento de brotes, tallos y estolones, además de costra negra en tubérculos. Con el objetivo de evaluar la interacción de la calidad de semilla utilizada, tratamiento químico del tubérculo semilla y la susceptibilidad del cultivar producido en el manejo integrado de la Rizoctoniasis de la papa se estableció un experimento de campo en la temporada 2004-05, en Osorno, Décima región de Chile. Se utilizó un diseño bloques completos al azar en ordenamiento factorial 2x2x2, con 4 repeticiones. Los factores evaluados fueron semilla certificada ó corriente, tratamiento con fungicida en base fludioxonil ó sin fungicida, cultivar Atlantic ó Desirée. Todos bajo riego por aspersión o en secano. Durante el desarrollo del cultivo se determinó población de plantas, incidencia de cancros en brotes, tallos y estolones, costra negra en tubérculos y rendimiento. Se detectó un efecto significativo del riego para rendimiento total y comercial, aumentando un 30% promedio en las parcelas con riego. Adicionalmente, en el análisis de factores simples se determinó que los factores más importantes que determinan la calidad y el rendimiento del cultivo son el uso de semilla certificada y el tratamiento de semilla, aumentando el rendimiento comercial en 54 y 38% en parcelas con riego y 29 y 11% en parcelas de secano, respectivamente. Igualmente, la interacción de factores fue significativa para calidad de semilla con tratamiento de semilla, siendo significativa para las variables sanidad de plantas, población y rendimiento.
Control del Repilo del olivo causado por
Spilocaea oleagina en un huerto orgánico de olivos La enfermedad conocida como Repilo del olivo se caracteriza por la presencia de manchas oscuras subcirculares sobre las hojas, que posteriormente resulta en una importante defoliación de los árboles. La enfermedad alcanza niveles de importancia sólo en algunos huertos y de acuerdo con la literatura internacional es controlada eficientemente mediante el uso de fungicidas convencionales. En agricultura orgánica la enfermedad es manejada mediante aplicaciones de sales cúpricas. Sin embargo, el cobre induce caída de flores y frutos recién cuajados y además deteriora la calidad del aceite cuando se le utiliza próximo a la cosecha. Con estos antecedentes y sumado a las constantes restricciones de uso de compuestos cúpricos en producciones orgánicas, se realizó un ensayo de campo, para determinar el efecto de aplicaciones de fungicidas compatibles con manejo orgánico sobre la enfermedad. El estudio se realizó en un huerto del cultivar Frantoio ubicado en la comuna de Melipilla en la Región Metropolitana. Los fungicidas y dosis utilizadas fueron: “extracto de semilla de toronjas” (BC – 1000, 180 cc/Hl), Citrex + saponinas (Lonlife Plus, 150cc/Hl), Sulfato de cobre pentahidratado (Phyton, 1 l/Ha), Cobre y Zinc quelados (Dentament, 500 cc/Hl), Aminoçácidos libres (Terrasorb, 101 g/l), Bacillus subtilis (Serenade, 14 l/Ha). Se realizaron 3 aplicaciones (sólo 2 en el tratamiento con Bacillus) en primavera del 2004 con un mojamiento de 5 l/ árbol a 300 psi de trabajo. El estudio se realizó con un diseño de bloques completos al azar con 4 repeticiones de 3 árboles. Se observó esporulación del hongo sobre el follaje desde el 15 de octubre y hasta el 14 de diciembre, produciéndose 2 picks en la temporada (mediados de octubre y fines de noviembre). La incidencia de la enfermedad en el testigo sin tratamiento fue de un 45,3%. Los tratamientos que presentaron la menor incidencia fueron citrex + saponinas, “extracto de semillas de toronja” y sulfato de cobre pentahidratado. Rol de Acetobacter aceti en la etiología
de la pudrición ácida de vides en Chile La Pudrición ácida (PA) ha causado un fuerte impacto económico en la producción de uva de mesa en las últimas temporadas. En la etiología de la PA participan hongos, levaduras y recientemente se ha sugerido un rol importante a las bacterias acéticas. El objetivo de este trabajo fue identificar las especies de bacterias acéticas aisladas de uvas con síntomas de PA. Se identificó la especie bacteriana de 134 cepas de acetobacterias, aisladas de uvas de mesa con PA de las variedades Red Globe y Thompson Seedless, provenientes de parrones de las Regiones IV, V, VI y Metropolitana, mediante PCR- RFLP. Para ello se utilizó partidores que amplifican una secuencia conservada específica de la región 16S –rDNA y se caracterizó las diferencias genómicas intrínsecas entre las cepas mediante ERIC-PCR en 15 aislados de A. aceti (13 provenientes de uva con PA y 2 de uva sana). La especie mas frecuentemente aislada fue Acetobacter aceti, con 107/134 (80%) cepas, las cuales provenían principalmente desde uvas afectadas por la patología. Tasas significativamente menores se obtuvieron para las especies Gluconoacetobacter hansenii 22/134 (16%), Acetobacter pasteurianus 4/134 (3%) y Gluconobacter oxidans 1/134 (0.7%). El ERIC-PCR mostró que 5/13 (38%) cepas provenientes de uvas enfermas de las regiones V y Metropolitana presentaron un mismo patrón de bandas (700, 1200 y 1500 pb.). Este es el primer reporte que determina una alta prevalencia de A. aceti en uvas afectadas por PA en Chile. Proyecto DI MULT 04/05-2.
La sensibilidad in vitro a fungicidas comúnmente utilizados en uva de mesa, fue evaluada en 48 cepas de bacterias del ecosistema natural de la uva que presentaron potencial inhibidor sobre bacterias acéticas. Las cepas probadas fueron seleccionadas de entre 187 cepas aisladas de suelo, hojas, sarmientos y bayas sanas de uva de mesa. La selección se realizó determinando la capacidad antagónica contra dos cepas reveladoras, Bacillus BGA y/o E. coli ATCC 25922. Los fungicidas evaluados fueron BC – 1000, benomilo, iprodione, kresoxym metil, ciprodinil + fludioxonil (C+F), y fenhexamida + tebuconazole (F+T), en concentraciones de 0, 1, 10 y 100 ppm i.a., mediante dilución en Agar Mueller Hinton y fueron cultivadas a 25ºC en aerobiosis por 4 días. Los resultados mostraron que la mayoría de las cepas de bacterias ambientales fueron sensibles a los agroquímicos empleados. BC-1000 fue el fungicida que presentó la mayor actividad inhibiendo el crecimiento del 50% de las cepas, a 10 y 100 ppm i.a. Las mezclas de fungicidas C+F y F+T tuvieron actividad sobre un 22,9 y 16,7 % de las cepas, respectivamente. Iprodione inhibió el crecimiento de 4 cepas (8,3%), mientras que benomilo y kresoxym metil sólo inhibieron el crecimiento de una cepa, es decir, estos dos productos fueron los que deberían generar un menor impacto ambiental. Una cepa fue altamente sensible a los fungicidas BC-1000, iprodione y kresoxym metil, presentando inhibición incluso a 1 ppm i.a. La mayor parte de las cepas que presentaron algún grado de inhibición (75%), fueron afectadas por los fungicidas sólo a la mayor concentración estudiada. En resumen sólo 6 cepas (12,5%) evaluadas fueron resistentes a los fungicidas incluidos en el estudio.
Con el fin de determinar in vitro la capacidad antagónica de mutantes
de Trichoderma harzianum (Th), T. piluliferum (Tpi) y T. viride (Tvi), sobre los
patógenos Rhizoctonia solani cepa 509 (GA 2-1), Rhizoctonia solani cepa 618 (GA 4) y
Phytophthora nicotianae cepa 699 aislados de plantas de tomate, se efectuaron tres pruebas
de interacción patógeno antagonista. Dichos ensayos correspondieron a antagonismo
directo en cultivos duales en placas de Petri, metabolitos volátiles y metabolitos
difusibles. Todos los ensayos se desarrollaron a la temperatura y pH óptimos de los
patógenos en estudio. Los mutantes se obtuvieron en estudios previos por medio de nitroso
guanidinio y luz ultravioleta A (320 nm) y C (256 nm), de progenitores caracterizados y
seleccionados por su capacidad para expresar mecanismos múltiples de antagonismo. Aunque
todos los mutantes demostraron un cierto grado de capacidad antagónica inhibiendo el
crecimiento de las cepas patógenas en estudio, los mejores mutantes obtenidos con luz
ultravioleta A y C según efectividad y espectro de acción sobre Rhizoctonia solani
(Cepas 618 y 509) y Phytophthora nicotianae cepa 699 fueron Th 11 A 20.1, Th 11 A 80.1, Th
11 A 160.1 y Th 12 A 10.1, provenientes de las cepas de T. harzianum 11 y 12,
respectivamente; mientras que para mutantes de nitroso guanidinio el mejor mutante fue Tvi
NG 10 proveniente de la cepa T. viride. Al efectuar un análisis de la sumatoria de las
características antagónicas (cultivos duales, metabolitos volátiles y metabolitos
difusibles) de los mutantes que presentaron un control estadísticamente significativo y
destacado, en algunas de las pruebas, en relación a sus cepas padres y que a la vez
fueron de amplio espectro, se determinó que los mejores mutantes para el control de las
cepas patógenas investigadas fueron Th 11 A 20.1, Th 11 A 80.1, Th 11 A 160.1 y Th 12 A
10.1 todos obtenidos mediante luz ultra violeta. Los resultados obtenidos in vitro, se
evalúan actualmente en bioensayos con tomates cultivados en invernaderos. Formulaciones y estrategia para mejorar el
biocontrol de enfermedades en cultivos de elevada importancia socioeconómica en Chile.
Modelos Rhizoctonia solani en papas y Erwinia carotovora en calas La producción intensiva de bienes agrícolas como lo son las calas de
colores y los tubérculos de papa están sujetos a diversos factores que afectan su
productividad. Entre ellos encontramos a los fitopatógenos Rhizoctonia solani y Erwinia
carotovora, causantes de la “rizoctoniasis” en papa y “pudrición
húmeda” en cala. Enfrentar estos agentes ha sido un desafío, en particular en
situaciones intensivas. El objetivo de esta presentación es informar de los lineamientos
generales de un proyecto recientemente puesto en ejecución cuya finalidad es generar
prototipos patentables de formulaciones biológicas que controlen estos dos agentes.
Microorganismos antagonistas ya han sido seleccionados de diferentes lugares y sistemas
agrícolas de la zona de Valdivia. Esta recolección se realizó evaluando una cantidad
importante de cepas bacterianas y de hongos de aquellos sistemas relacionados con la
producción de papas y cala. Los antagonistas más promisorios están siendo utilizados
para ser estudiados en sus características microbiológicas y su inocuidad hacia las
plantas y animales. Estudios recientes indican que el cultivo masivo de los agentes
antagonistas seleccionados son inocuos, fáciles de cultivar y que mantienen sus
actividades antagónicas. Utilizando productos comunes y de bajo costo es factible
diseñar estrategias de cultivo para multiplicarlos intensivamente. Los avances señalan
que las formulaciones diseñadas son a base de sustancias disponibles en la región. Se
estima que tanto los microorganismos específicos, sus características y los prototipos
que se están creando cumplen con los propósitos de un biopesticida. Enfermedades virales y similares en los
cultivos principales de los Andes >En los cultivos andinos entre los cuales se encuentran la papa y otras raíces y tubérculos, incluyendo el camote (Ipomoea batatas) sufren severas pérdidas debido a enfermedades causadas por virus, fitoplasmas y viroides. La lista de estas enfermedades ha crecido en los últimos años principalmente debido a cambios climáticos y también a cambios en prácticas culturales y variedades. Muchas de estas enfermedades se han diseminado alarmantemente y podrían constituirse en un futuro cercano como verdaderas catástrofes fitopatológicas. Un ejemplo que merece ser estudiado con prioridad es la enfermedad conocida como SB 26/29 en la papa, la cual es aparentemente causada por un virus y que se ha diseminado en el Sur de Perú aunque el vector está presente ya en algunos cultivos de los países vecinos. Este virus es transmitido por un nuevo vector de virus de plantas, el psílido Russelliana solanicola. Varios otros virus han sido estudiados en los últimos años en varios cultivos andinos, así como en cultivos en regiones cercanas. Los estudios realizados por el CIP están principalmente dirigidos al control de estas enfermedades por medio de la producción de semillas libres de estos patógenos y desarrollo de variedades resistentes y para ello el desarrollo de los métodos de diagnóstico es fundamental.
El tizón tardío es una enfermedad importante que afecta el cultivo de
papa (Solanum tuberosum) en la zona sur de Chile. Con el fin de determinar los grupos de
apareamiento de Phytophthora infestans y evaluar su resistencia a Metalaxilo, se realizó
una prospección en cultivos de papa de la IX y X región de Chile entre Enero y Abril de
2004. Se colectaron 313 muestras de plantas de papa con síntomas de tizón tardío,
resultando 160 positivas a este patógeno. El aislamiento in vitro del hongo se realizó
indirectamente por inoculación en rodajas y tubérculos de papa en medio Agar centeno y
Agar V8. Del total de muestras positivas se obtuvieron 98 aislamientos, lo que representa
un 61% de establecimiento del patógeno en medio artificial. Se caracterizaron 82
aislamientos del hongo a través del apareamiento con controles A1 y A2 de P. infestans
resultando todos pertenecientes al grupo A1 del hongo. Los 98 aislamientos obtenidos
fueron evaluados en su resistencia in vitro al fungicida Metalaxilo, determinando el
porcentaje de crecimiento en concentraciones de 0.1; 1; 10 y 100 mg ia/ml respecto al
control sin Metalaxilo. Se calculó para cada aislamiento la concentración de Metalaxilo
que inhibió el 50% del crecimiento (EC50) utilizando la regresión entre el crecimiento
micelial relativo versus la concentración del fungicida. Todos los aislamientos de P
.infestans fueron sensibles a metalaxilo con valores de EC50 entre 0,06 y 3,01 mg ia/ml.
Neofabraea spp. es el agente causal de la enfermedad de postcosecha “ojo de buey”, la que ha causado en las últimas temporadas importantes pérdidas debido al aumento de la incidencia y severidad de esta patología, especialmente en variedades de cosecha tardía como Fuji y Pink Lady. En Chile existe poca información sobre el ciclo biológico del hongo y sobre su epidemiología en el manzano. Por lo tanto, es de fundamental importancia identificar y ubicar en el huerto las fuentes de inóculo del hongo causante de esta enfermedad, para planificar de mejor manera las estrategias de su control. Para tal efecto se realizó un levantamiento recolectando muestras desde dos huertos de Pink Lady en la VII Región ubicados en la localidad de Sagrada Familia (35° 01’ S; 71° 86’ O) y de Colbún (35° 40’ S; 71° 26’ O). El material vegetal muestreado fueron hojarascas, frutos momificados y restos de poda desde el suelo; cancros o alteraciones de la madera del árbol; segmentos de madera y yemas desde ramillas de la temporada; fruta en desarrollo; fruta rezagada de la cosecha; fruta con síntomas de pudrición ubicados en el árbol y en piso de los huertos. El examen visual de cada material recolectado permitió identificar acérvulos atribuibles a Neofabraea spp. ubicados en ramillas provenientes de los restos de poda; y en frutitos momificados provenientes del raleo de la temporada. Además se obtuvieron cultivos puros de Neofabraea spp. desde lesiones con la sintomatología típica en fruta dejada en el huerto luego de la cosecha. En un experimento para evaluar la eficacia de estas fuentes de inóculo en infectar manzanas Pink Lady sanas, se dejaron éstas incubando en cámara húmeda en conjunto con frutitos momificados con acérvulos, durante 30 días a T° de 20°C. Los testigos, los cuales consistieron en frutas sanas solamente presentaron una incidencia de un 10%, a diferencia de aquellas con la fuente de inóculo, las cuales alcanzaron un 80% de pudrición “ojo de buey”. Por lo tanto, las fuentes de inóculo de Neofabraea spp. en los huertos de manzano estarían ubicados en los frutitos momificados provenientes del raleo, frutos con pudrición dejadas luego de la cosecha en el piso del huerto y en los árboles, así como las ramillas dejadas luego de la poda.
Phytophthora infestans es un patógeno que causa la enfermedad conocida
como Tizón tardío en el cultivo de papa, afectando la calidad y rendimiento. Sobrevive
sólo en tejido vivo, infestando hojas, tallos y tubérculos. Una adecuada estrategia de
control se facilita al conocer la situación genética de las poblaciones de este
patógeno. Con el objetivo de determinar la estructura genética de la población de P.
infestans del sur de Chile, zona de mayor producción de papa, se caracterizó
molecularmente poblaciones de P. infestans de la IX y X región durante la temporada
2003-04. Para lo cual, se colectaron 99 aislamientos en la zona sur y se analizaron sus
patrones isoenzimáticos, GPI (glucosa-6-fosfato isomerasa) y PEP (peptidasa), y
marcadores de ADN SSR (microsatélites), Pi02, Pi04, Pi56, Pi66, Pi33, Pi70, Pi16 y Pi26.
El análisis de isoenzimas muestra una predominancia de sólo un genotipo, heterocigoto
para ambas enzimas, excepto dos aislamientos que resultaron homocigotos para los mismos
alelos de la enzima PEP encontrados en el resto de la población. La escasa variabilidad
genética sugiere que estamos en presencia de una población homogénea y de propagación
asexual. Los análisis de marcadores SSR hasta ahora muestran resultados similares. Susceptibilidad larvaria de Spodoptera
frugiperda (J. E. Smith) a una cepa nativa de nematodo entomopatógeno Steinernema sp, del
sur de Chile Spodoptera frugiperda es una plaga primaria del maíz que en la zona de Arica se controla con insecticidas convencionales de amplio espectro de acción. El objetivo general de este estudio es contribuir al desarrollo de una alternativa de control microbiológica. Los objetivos específicos fueron evaluar la susceptibilidad de las larvas de S. frugiperda al nematodo entomopatógeno Steinernema sp., verificar los postulados de Koch, determinar la patogenicidad del nemátodo, y el grado de eficacia en el control de larvas en condiciones de laboratorio. La investigación se realizó en la facultad de Agronomía de la Universidad de Tarapacá, Km 12 del valle de Azapa, Arica. Se evaluó la susceptibilidad de larvas de Spodoptera frugiperda utilizando una cepa nativa de la VIII Región del nematodo entomopatógeno Steinernema sp. (INIA-Quilamapu). Para ello, se estableció un bioensayo donde larvas de este Lepidóptero se inocularon con 3 concentraciones del nematodo. Estas fueron 0, 500, 1.000, 1.500 nematodos/mL aplicados con micropipeta sobre el cuerpo de las larvas. La unidad experimental se definió como una cámara húmeda consistente en un envase de plástico conteniendo 5 larvas del II y III estadio criadas en laboratorio. Los envases fueron rotulados, cerrados y mantenidos con temperatura mínima de 17,5ºC y máxima promedio de 28ºC. Cada tratamiento tuvo 10 repeticiones, con un diseño completamente al azar. Las evaluaciones se realizaron a las 48 y 72 horas después de la aplicación. Se recurrió a la fórmula de Abbott para determinar la eficacia de los nematodos y la susceptibilidad de Spodoptera frugiperda. Se comprobaron los postulados de Koch en cámaras White modificadas recuperando los nematodos en las larvas parasitadas. Los datos indicaron diferencias entre los tratamientos. Se concluyó que la concentración más alta fue la de mayor eficacia con un 73,3% (24 horas) y de un 86,5% (72 horas), luego la concentración intermedia con un 44% (48 horas) y 71,5% (72 horas), y por último la concentración más baja con un 29,33% (48 horas) y 66,6% (72 horas). Se concluye que la concentración más elevada obtuvo porcentajes altos de eficacia a las 48 y 72 horas posteriores a la aplicación, siendo por consecuencia la concentración más eficaz para realizar el control de la plaga de Spodoptera frugiperda.
Hasta el momento se han descrito mas de tres decenas de virus que pueden ser transmitidos por distintos hongos vectores. Estos hongos se caracterizan por ser parásitos intracelulares obligados de las raíces de las plantas, por producir zoosporas mótiles en su ciclo de vida y por su capacidad de formar esporas de resistencia que le permiten sobrevivir entre cultivos, reteniendo la capacidad de transmitir los agentes virales por décadas. Hasta el año 2004 en Chile sólo se conocía de la presencia de la enfermedad de la vena ancha de la lechuga, y sus agentes virales asociados: el virus Mirafiori de la lechuga (MiLVV) y el virus de la vena ancha de la lechuga (LBVV), ambos transmitidos por el Chytridiomycete Olpidium brassicae. Durante el año 2005 se investigó la presencia de hongos vectores y sus respectivos agentes virales presentes en cultivos hortícolas de la zona central del país. Es así como se pudo constatar la presencia del hongo O. bornovanus, como agente vector del virus del cribado del Melón (Melon Necrotic Spot Virus, MNSV) y el hongo Polymyxa betae, como agente vector del virus de las venas amarillas necróticas de la remolacha (Beet Necrotic Yellow Vein Virus, BNYVV). Para la identificación de los complejos virus-vector se han utilizado técnicas de microscopia de luz y diagnóstico molecular. Actualmente se están desarrollando sistemas de detección para estos hongos vectores en base a la amplificación por PCR de secuencias que codifican para regiones de los operones ribosomales (rDNA). De igual forma, se están optimizando técnicas que permitan identificar a los agentes virales en las posibles fuentes de contaminación: semillas, almácigos, sustratos, suelo, etc. La emergencia de estas nuevas enfermedades virales en el país, cuyos agentes vectores son hongos del suelo, plantea un serio desafío para su control y/o erradicación.
Crimson Seedless es una variedad de uva de mesa de alto interés entre
los productores chilenos. Sin embargo, en los últimos cuatro años, durante el periodo de
cosecha, se observó frecuentemente una reducción, o ausencia de coloración de las
bayas, que impide la comercialización de los racimos causando pérdidas que en algunos
predios han alcanzado el 100% de la producción. Con el fin de establecer el origen de tal
alteración se han realizado análisis virológicos utilizando las técnicas DAS-ELISA
para la detección de Grapevine fanleaf virus (GFLV), Grapevine leafroll-associated virus
1, -2 y -3 (GLRaV-1, GLRaV-2 y GLRaV-3), Tomato ringspot virus (ToRSV) y Grapevine virus A
(GVA), y DASI-ELISA para Grapevine virus B (GVB) y Grapevine fleck virus (GFkV). Se han
analizado 70 plantas con y sin síntomas y los resultados obtenidos revelan que los
agentes etiológicos responsables de la alteración son el Closterovirus GLRaV-2 y los
Ampelovirus GLRaV- 1 y 3. Plantas infectadas simultáneamente por dos o tres de estos
virus, manifiestan síntomas más intensos, incluso racimos completamente verdes, cuyas
bayas presentan una elevada acidez y baja concentración de azúcares.
En Chile los frutales de carozo son afectados por Plum pox virus (PPV), cepa D, que provoca serias pérdidas económicas. Para su detección se emplean las técnicas ELISA, RT-PCR y el indexaje en plantas del género Prunus L., como Prunus tomentosa Thunb y GF 305 (Prunus persica Bastch L.). En este trabajo se evaluó el comportamiento biológico de Adesoto 101 (Prunus insititia L.) frente a los aislamientos del virus PPV-D (Chile 20, Chile 112 y Chile 116), procedentes de huertos comerciales de la zona central de Chile. La inoculación se realizó con la técnica del “chip-budding”, con 10 repeticiones por aislamiento viral. Se confirmó la presencia del virus mediante ELISA. Las plantas con Chile 112 y Chile 20 presentaban deformaciones de hojas y clorosis perinervales. Las que fueron inoculadas con Chile 116 presentaban además manchas cloróticas redonda en las primeras hojas. De las 30 plantas inoculadas, solo una (con Chile 112) no manifestó síntomas y resultó negativa a PPV con ELISA. Por la claridad y abundancia de síntomas presentados por Adesoto 101, se propone este patrón como nueva planta indicadora para PPV.
Para caracterizar fenotípicamente aislados de S. sclerotiorum obtenidos de lechuga, se consideraron 2 localidades de la Provincia de Quillota (Carolmo y San Pedro), 32º53´47´´lat Sur. 71º,17´02´´long Oeste, 2 predios por localidad, 2 aislados por predio. Se realizó la colecta en mayo 2005. En total 4 aislados de S. sclerotiorum por localidad. Se evaluó la tasa de crecimiento micelial, número y tamaño de esclerocios. Se empleó PDA acidificado y se sembró los esclerócios desinfectados (con hipoclorito de sodio al 1% y alcohol a 50%) e incubó durante 7 días; a 22ºC ±2ºC. Para evaluar la tasa de liberación de ácido oxálico se cultivo esclerócios en PDA con rojo de metilo (como indicador de cambio de pH), con incubación por 7 días a 22ºC ±2ºC, se midió el diámetro del halo de color amarillo. En la prueba para determinar agresividad se dispusó los esclerócios en trozos de zanahoria sobre papel absorvente humedecido a 22ºC ±2ºC, durante 7 días. Con 5 repeticiones por aislado en cada subensayo. Mediante el bloques completamente al azar y análisis de medias mediante Duncan (p = 0,05). Se determinó diferencias fenotípicas significativas entre los aislados de ambas localidades Carolmo y San Pedro; expresadas como tasa de crecimiento micelial media de 10,5 y 13 mm, al quinto día; número de esclerócios media de 18 y 22; tamaño promedio de 3,2 x 2,8 mm y de 2,6 x 2,0 mm; tasa de liberación de ácido oxálico promedio 7,6 y 8 mm/día; agresividad de 63,4 y de 51% respectivamente.
Caracterización molecular de Trichoderma
spp con actividad de biocontrol sobre hongos fitopatógenos formadores de esclerócios Con el propósito de caracterizar Trichoderma nativos de una de las regiones agrícolas más importantes de Chile, Región Metropolitana (Latitud 33º 08` Sur; 70º 54´ Longitud Oeste), se realizó el presente trabajo cuya hipótesis fue; los aislamientos de Trichoderma spp con actividad de biocontrol nativas de la misma área de colecta presentan similitud entre ellas. A partir de ensayos in vitro se seleccionaron 5 cepas de Trichoderma spp nativas con actividad de biocontrol sobre Sclerotinia sclerotiorum, Sclerotinia minor, Sclerotium rolfsii y Botrytis cinerea. Cada una presentó inhibición in vitro sobre la germinación micelial de esclerócios de los patógenos mencionados, entre 70 y 90 %. La metodología consistió en macerar el micelio mediante microperlas de vidrio con pulsos de movimiento en equipo de Beat Beater. Luego de la centrifugación (10.000 rpm por 3 min), se realizó electroforesis en gel de agarosa para visualizar el DNA. Este fue purificado y posteriormente 25 ng fueron empleados como templado para una amplificación con partidor arbitrario AP-PCR (Arbitrary Primed-Polimerase Chain Reaction). Los productos de amplificación se analizaron por electroforesis en poliacrilamida. Finalmente a partir del perfil de bandas obtenidas se procedió a estimar la distancia filogenética entre los 5 aislados de Trichoderma. Se determinó que el conjunto de aislamientos estudiados, con actividad de biocontrol, presentaron tres grupos de similitud. El aislado T5 presentó la mayor actividad de biocontrol y fué el más alejado filogenéticamente. Estas cepas seguirán en análisis para determinar sus propiedades bioquímicas y parámetros de crecimiento. Diversidad de hongos asociados a
esclerócios de Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary. expuestos a diferentes compuestos
orgánicos Con el propósito de determinar la diversidad fúngica de diversos compuestos orgánicos, con capacidad de colonizar los esclerócios de S sclerotiorum y de reducir su germinación micelial, se consideró los siguientes tratamientos: T0 (Arena estéril); T1 (Arena estéril + Benomilo); T2 (Humus Ecobol-S â); T3 (Compost 21 â T4 (Compost UDM); T5 (Compost ANASAC â), con 4 repeticiones por tratamiento. Se emplearon 3 esclerócios (obtenidos in vitro), por repetición. Cada repetición consistió en cajas de 200 gr. con sustratos sin dilución, humedecidos a capacidad de campo por 21 días a 15ºC donde se mantuvo los esclerócios cubiertos con 1 cm de sustrato. A los 21 días se retiró 4 esclerócios de cada tratamiento y se dispusieron individualmente en medio PDA acidificado los que se incubaron a 22ºC±2ºC durante 7 días. Se determinó la diversidad de hongos asociados a los esclerócios por tratamiento y el porcentaje de presencia relativa de cada uno de ellos. A partir de los resultados se determinó 4 géneros de hongos que fueron comunes; (Trichoderma spp., Rhizopus spp., Fusarium spp y Mucor spp.). Trichoderma spp se presentó en todos los tratamientos predominando en el tratamiento compost 21â en 80 % de las repeticiones y en 6,5 % en el tratamiento compost Udelmar. En el tratamiento compost 21 se obtuvo 75% de inhibición del crecimiento micelial de S. sclerotiorum respecto del testigo.
Efecto in vitro del biofertilizante
Ecobol-L â sobre Meloidogyne spp (Chitwood,1949) estado juvenil 2 y Xiphinema index
(Thorne y Allen,1950) (Cohn y Sher,1972) juvenil 2 y adultos El humus de lombriz líquido (Ecobol-L®), es aplicado a través de fertirriego en hortalizas y frutales en dosis de 2 a 3 ml/l como biofertilizante. En el presente ensayo se propuso evaluar in vitro el efecto del producto sobre la movilidad de nematodos fitoparásitos como Meloidogyne spp y Xiphinema index a diferentes concentraciones. Los objetivos específicos fueron;1.Determinar el efecto nematicida y nemastático de Ecobol-L® sobre Meloidogyne spp. y Xiphinema index. 2. Establecer las dosis de Ecobol-L® más efectivas sobre cada nematodo fitopatógeno en estudio. Se emplearon nematodos en segundo estadio juvenil (J2) para Meloidogyne spp y (J2) y adultos de Xiphinema index. Considerandose 8 tratamientos con Ecobol-L®, diluído en dosis 0,5; 1; 2; 3; 5; 10; 20ml/l y 2 ml sin dilución, más dos controles, con agua destilada estéril y el i.a. Etoprophos en dosis comercial. Se evaluó la movilidad de los nematodos a las 24, 48 y 72 hrs respectivamnete. Se determinó el efecto nemastático como inmovilidad y el efecto nematicida realizando inmersión de los nematodos en agua destilada estéril post tratamiento. El análisis estadístico fué Completamente al azar, con análisis de medias a través de Tukey (p=0,05). Con cinco repeticiones por tratamiento, considerando 20 nematodos por repetición. A partir de los resultados se determinó el efecto nemástatico en dosis inferiores a 10 ml/ l y actividad nematicida (p=0,05) en dosis superiores 10 ml/l sobre Xiphinema index 24, 48 y 72 hrs .Mientras que sobre Meloidogyne spp, sólo se determinó efecto nematicida en dosis de 2 ml del producto sin dilución a las 24, 48 y 72 hrs respectivamente.
Determinación
de la importancia de Pepino mosaic potexvirus-PepMV en áreas productoras de tomate bajo
invernadero de la zona central de Chile Durante la temporada 2004/2005 se efectuó un muestreo dirigido hacia plantas de tomate y malezas asociadas al cultivo, en invernaderos ubicados en la regiones V, Metropolitana, VI y VII. Este consideró plantas con síntomas atribuibles a enfermedades de naturaleza viral e individuos tanto sintomáticos como asintomáticos en el caso de malezas. El objetivo fue establecer la importancia del Pepino mosaic potexvirus-PepMV en algunas áreas productoras de la zona central de Chile. Un total de 60 muestras de hojas de tomate y 48 de hojas de malezas fueron recolectadas, siendo detectado el virus en todas las zonas prospectadas. En el caso de malezas fue posible determinar la presencia del patógeno en los géneros Taraxacum, Plantago, Chenopodium, Brassica, Senecio, Convolvulus, Bidens, Urtica, Euphorbia, Silene, y Mentha, además de Amaranthus, Malva, Nicotiana, Solanum y Sonchus, ya descritas previamente en Europa como hospederos alternantes del virus. Adicionalmente, a fines de la temporada 2004/2005, y con el fin de determinar la importancia de restos de cultivo como fuente de inóculo del patógeno, desde un invernadero de tomate infectado con el virus, se recolectaron muestras de raíces, tallos y hojas del cultivo, durante los seis meses posteriores al término de cosecha. Los resultados obtenidos indicaron que el patógeno es capaz de mantenerse a niveles detectables por DAS-ELISA hasta un mes luego de la incorporación de los rastrojos al suelo.
Evaluación de cepas nativas de Bacillus
spp. en el biocontrol de Pseudomonas syringae pv. tomato en cultivos de tomate bajo
invernadero La evaluación de una mezcla de cepas nativas de Bacillus spp. sobre la
enfermedad peca bacteriana causada por Pseudomonas syringae pv. syringae fue realizada en
ensayos de invernadero en la localidad de Quillota (V Región) y Colín (VII Región). Los
tratamientos consistieron en 1) control tradicional del predio (caldo bordelés,
oxicloruro de cobre y antibioticos); 2) la mezcla de cepas nativas de Bacillus spp.; y 3)
la combinación de los dos tratamientos anteriores. Los resultados obtenidos indican un
claro efecto significativo de los tratamientos, logrando la mezcla de las bacterias
biocontroladoras un efecto similar o superior al control tradicional del invernadero
comercial. Además, fue posible comprobar un efecto curativo de las cepas de Bacillus,
sobre las lesiones producidas por la bacteria fitopatógena. Determinación de las fuentes de inóculo
del hongo Neofabraea spp. causante de la pudrición de postcosecha “Ojo de Buey”
en manzanos de la VII región Neofabraea spp. es el agente causal de la enfermedad de postcosecha “ojo de buey”, la que ha causado en las últimas temporadas importantes pérdidas debido al aumento de la incidencia y severidad de esta patología, especialmente en variedades de cosecha tardía como Fuji y Pink Lady. En Chile existe poca información sobre el ciclo biológico del hongo y sobre su epidemiología en el manzano. Por lo tanto, es de fundamental importancia identificar y ubicar en el huerto las fuentes de inóculo del hongo causante de esta enfermedad, para planificar de mejor manera las estrategias de su control. Para tal efecto se realizó un levantamiento recolectando muestras desde dos huertos de Pink Lady en la VII Región ubicados en la localidad de Sagrada Familia (35° 01’ S; 71° 86’ O) y de Colbún (35° 40’ S; 71° 26’ O). El material vegetal muestreado fueron hojarascas, frutos momificados y restos de poda desde el suelo; cancros o alteraciones de la madera del árbol; segmentos de madera y yemas desde ramillas de la temporada; fruta en desarrollo; fruta rezagada de la cosecha; fruta con síntomas de pudrición ubicados en el árbol y en piso de los huertos. El examen visual de cada material recolectado permitió identificar acérvulos atribuibles a Neofabraea spp. ubicados en ramillas provenientes de los restos de poda; y en frutitos momificados provenientes del raleo de la temporada. Además se obtuvieron cultivos puros de Neofabraea spp. desde lesiones con la sintomatología típica en fruta dejada en el huerto luego de la cosecha. En un experimento para evaluar la eficacia de estas fuentes de inóculo en infectar manzanas Pink Lady sanas, se dejaron éstas incubando en cámara húmeda en conjunto con frutitos momificados con acérvulos, durante 30 días a T° de 20°C. Los testigos, los cuales consistieron en frutas sanas solamente presentaron una incidencia de un 10%, a diferencia de aquellas con la fuente de inóculo, las cuales alcanzaron un 80% de pudrición “ojo de buey”. Por lo tanto, las fuentes de inóculo de Neofabraea spp. en los huertos de manzano estarían ubicados en los frutitos momificados provenientes del raleo, frutos con pudrición dejadas luego de la cosecha en el piso del huerto y en los árboles, así como las ramillas dejadas luego de la poda. Evaluación de la eficacia biocontroladora
de cepas nativas de Bacillus spp. sobre la pudrición blanda en tubérculos de papa
almacenados causada por Erwinia carotovora subsp. Carotovora La eficacia biocontroladora de cepas nativas de Bacillus spp. sobre
Erwinia carotovora subsp. carotovora fue evaluada en un ensayo de laboratorio con papas
cv. Desiree. Estas fueron puestas en condiciones de alta humedad relativa, para luego ser
inoculadas con una suspensión de la bacteria patógena, en una concentración de 106
UFC/ml, antes y después de la aplicación de una mezcla de tres cepas nativas de Bacillus
spp. (cepas Vilcún, Antumávida y Maguellines). De esta forma, los tratamientos fueron:
1) papas sin inoculación; 2) papas inoculadas con el patógeno, sin aplicación de
Bacillus; 3 y 4) papas inoculadas antes y después de la aplicación de la mezcla de
Bacillus, respectivamente. La dosis de aplicación de las cepas biocontroladoras fue de
100 ml por Kg de papas, a una concentración de 107 UFC/ml. Una vez aplicados los
tratamientos, los tubérculos fueron envueltos en una lámina plástica, y puestos en
almacenaje en cajas de cartón por 90 días. Luego de este periodo, se evaluó la
incidencia de pudrición. Sólo los tratamientos con aplicación de la mezcla de Bacillus,
posterior a la inoculación (T4), y el control sin inoculación (T1), presentaron una
incidencia significativamente menor (P<0,05), que la obtenida por el testigo con
inoculación (T2). Análisis multifactorial para determinar
condiciones predisponentes a pudrición del racimo en uva cv. Red Globe En la temporada 2004-2005 se llevó a cabo un estudio conducente a analizar un conjunto de variables abióticas y biológicas, que pudieran predisponer a racimos del cv. Red Globe a desarrollar pudrición ácida. Se analizó el índice de daño (ID) al momento de cosecha y a los 60 y 120 días de almacenaje refrigerado. La información base se obtuvo de 20 predios, distribuidos entre la IV y VI regiones de Chile, con antecedentes de niveles diferenciados de incidencia de la enfermedad. En cada predio se obtuvo datos tanto de los registros BPA como de mediciones semanales efectuadas en cuarteles previamente seleccionados. Adicionalmente, se realizaron análisis de laboratorio para determinar los contenidos de nutrientes en tejido foliar, fruto y suelo. La información se tabuló y se procesó (programa estadístico MINITAB) con el objeto de asociar y jerarquizar las variables que explican, en niveles significativos, el ID observado en: cosecha, 60 y 120 días de almacenaje refrigerado. El ID observado se determinó como promedio de 8 cajas en cada fecha y se expresó en una escala de 0 a 5. Los resultados indican que los factores que presentan mayor efecto sobre el ID (p < 0,05) son: (1) en cosecha: ‘incidencia de oídio’, ‘contenido de N en el suelo’, ‘número de horas con racimo mojado (> 90% de humedad)’ y ‘número de aplicaciones de insecticida’; (2) 60 días: ‘contenido de N en el suelo’, ‘incidencia de oídio’ y ‘contenido foliar de Cu’; (3) 120 días: ‘incidencia de oídio’, ‘contenido de N en el suelo’, ‘incidencia de Botrytis’ y ‘número de aplicaciones de fungicida contra Botrytis’.
Etiología del complejo de
pudrición del racimo en uva cv. Red Globe, determinada mediante inoculaciones sucesivas Durante los últimos años, se han descrito una serie de microorganismos asociados a un problema denominado “pudrición ácida”, que afecta racimos tanto para uva de mesa como para vino. En este complejo se han involucrado diversas especies de hongos filamentosos, levaduras y bacterias acéticas. Sin embargo, para el cv. Red Globe, principal variedad exportada en Chile, no existía claridad sobre qué microorganismos actuaban primero, y el peso que tenía cada uno de ellos en el desarrollo de la enfermedad. Con el propósito de aclarar la real etiología de este problema, se plantearon 4 ensayos de inoculaciones en bayas aparentemente sanas. El primero conducente a estudiar la patogenicidad de diferentes microorganismos, aislados de racimos con síntomas de pudrición acuosa, y los restantes con el propósito de realizar inoculaciones sucesivas, es decir, inoculando bayas en suficiente cantidad con cada uno de los agentes aislados, a modo de volver a re-inocular a los 4 días las bayas con ellos mismos y con los otros microorganismos involucrados. De los resultados obtenidos, se concluye que sólo Penicillium, Botrytis, Aspergillus y Rhizopus, fueron estadísticamente capaces de causar daño, diferentes a bayas testigo no inoculadas. En las inoculaciones desafiadas, sólo estas especies fungosas fueron capaces de causar daño en forma independiente o al ser inoculados con las otras especies fungosas. Las bacterias acéticas no causaron daño antes, ni al ser re-inoculadas, al igual que las cepas de levaduras empleadas. En base a los resultados obtenidos, proponemos que para el cv. Red Globe, la enfermedad sea conocida como “pudrición acuosa” o “pudrición del racimo”, y que sus agentes causales serían Botrytis cinerea, Aspergillus spp, Rhizopus stolonifer y Penicillium expansum, siendo esta última especie, la que presentó durante la temporada 2004-2005, la mayor incidencia en racimos afectados procedentes de diferentes zonas ubicadas entre la IV y VI regiones de Chile.
Evaluación de mutantes
de Trichoderma harzianum, producidos por fusión de protoplastos En Chile se ha evaluado el antagonismo de microorganismos frente a
distintos patógenos. En cultivo de tomate (Lycopersicon esculentum Mill.) se han
destacado cepas de Trichoderma harzianum debido al control que ejercen sobre importantes
enfermedades. A partir de las cepas nativas: Th11, Th12, Th291 y ThV, se recurrió a la
técnica de fusión de protoplastos para obtener ejemplares mejorados. Ésta consistió
básicamente en incubar una concentración de esporas en oscuridad, y con agitación
constante. Una vez obtenido el micelio se realizó una lisis enzimática de las paredes
celulares, se incorporó polietilenglicol para fusionar las distintas cepas, y se
realizaron diluciones seriadas para sembrar finalmente alícuotas de 100 µl en un medio
de regeneración de protoplastos. Se obtuvo seis series de mutantes por medio de seis
combinaciones de duplas de cepas parentales. Con estas cepas se realizaron una serie de
evaluaciones conducentes a evaluar su comportamiento sobre aislados de Pyrenochaeta
lycopersici y Phytophthora nicotianae, a pHs distintos, a bajas y altas temperaturas, la
capacidad de producir metabolitos volátiles y difusibles. Del total de pruebas realizadas
sobresalen los mutantes ThF1-2 y ThF4-4, los que permitirían augurar mejores resultados a
nivel de campo, situación que está bajo evaluación |